菌种保藏(culture preservation)是确保微生物菌株活力和遗传特性的重要技术,尤其在生物医疗研究中更显得至关重要。经过基因编辑或改造的菌种通常非常稀有且珍贵,因此必须采取妥善的保存措施。以下是菌种保藏的具体操作步骤:
菌种保藏步骤
首先,将待保存的菌液与配制好的甘油混合液以1:1的比例混合,最终使甘油浓度达到20%。可使用40%(v/v)甘油灭菌水的混合液。取2ml离心管或保菌管,加入500微升40%甘油-水混合液。接着,用移液枪吸取500微升的菌液,确保枪头深入液面以下缓慢加入将其混合。最后,将离心管或保菌管放入-80℃冰箱保存,并在保菌管上详细标注日期、菌种及抗性等信息,以便于后续识别。
菌液复苏步骤
保存的菌液可以进行复苏,以便进行后续操作。主要步骤如下:准备含有抗性的LB培养基,每个培养管加入约八毫升。所有操作均需在无菌操作台进行,以防止污染。向每个管中加入100微升的菌液,在37℃、180rpm条件下摇动12小时。
氨苄抗性配置
将1g氨苄青霉素钠溶解于10ml灭菌水中,过滤后保存在-20℃冰箱中,以备后用。制作LB培养基时,将10g氯化钠、10g胰蛋白胨和5g酵母提取物溶于1升的溶液中,再分装到250ml的锥形瓶中,每瓶包含100ml。最后,为LB培养基加入100微升氨苄抗性以增强其效果。
通过上述简单步骤,您可以高效保藏和复苏珍贵的菌种,为生物医疗相关的研究奠定坚实基础。与此同时,秉持金年会金字招牌诚信至上的原则,我们将为您的研究提供最可靠的支持,助力科研的每一步。